Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) adalah suatu teknik biokimia yang
terutama digunakan dalam bidang imunologi untuk mendeteksi kehadiran antibodi
atau antigen dalam suatu sampel. ELISA telah digunakan sebagai alat diagnostik
dalam bidang medis, patologi tumbuhan, dan juga berbagai bidang industri. Dalam
pengertian sederhana, sejumlah antigen yang tidak dikenal ditempelkan pada
suatu permukaan, kemudian antibodi spesifik dicucikan pada permukaan tersebut,
sehingga akan berikatan dengan antigennya. Antibodi ini terikat dengan suatu enzim,
dan pada tahap terakhir, ditambahkan substansi yang dapat diubah oleh enzim
menjadi sinyal yang dapat dideteksi.
Penggunaan ELISA melibatkan setidaknya satu antibodi
dengan spesifitas untuk antigen tertentu. Sampel dengan jumlah antigen yang
tidak diketahui diimobilisasi pada suatu permukaan solid (biasanya berupa
lempeng mikrotiter polistirene), baik yang non-spesifik (melalui penyerapan
pada permukaan) atau spesifik (melalui penangkapan oleh antibodi lain
yang spesifik untuk antigen yang sama, disebut ‘sandwich’ ELISA).
Setelah antigen diimobilisasi, antibodi pendeteksi ditambahkan, membentuk
kompleks dengan antigen. Antibodi pendeteksi dapat berikatan juga dengan enzim,
atau dapat dideteksi secara langsung oleh antibodi sekunder yang
berikatan dengan enzim melalui biokonjugasi. Di antara tiap tahap, plate harus
dicuci dengan larutan deterjen lembut untuk membuang kelebihan protein atau
antibodi yang tidak terikat. Setelah tahap pencucian terakhir, dalam plate ditambahkan
substrat enzimatik untuk memproduksi sinyal yang visibel, yang
menunjukkan kuantitas antigen dalam sampel.
Aplikasi ELISA
ELISA dapat mengevaluasi kehadiran antigen dan
antibodi dalam suatu sampel, karenanya merupakan metode yang sangat berguna
untuk mendeterminasi konsentrasi antibodi dalam serum (seperti
dalam tes HIV), dan juga untuk mendeteksi kehadiran antigen. Metode ini juga bisa
diaplikasikan dalam indiustri makanan untuk mendeteksi allergen potensial dalam
makanan seperti susu, kacang, walnut, almond, dan telur. ELISA juga dapat
digunakan dalam bidang toksikologi untuk uji pendugaan cepat pada berbagai
kelas obat.
Teknik-Teknik ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Sebagai Alat Diagnostik Ampuh Dalam Bidang Medis, Patologi Tumbuhan Serta Berguna Dalam Bidang Industri
4/
5
Oleh
Wahid Priyono,S.Pd.
